Fluorescence میکروسکوپيکي: د میتود اصول

د رڼا د لا عضوی او عضوي مايعاتو د جذب او بیا خپریدلو ده د phosphorescence یا fluorescence پایله ده. د د پدیدو تر منځ توپیر دی د رڼا د بدلون په جذب او خپریدلو تر منځ د فاصلې د مودې. کله چې د دغو پروسو د fluorescence نږدې وخت واقع کيږي، په داسې حال کې phosphorescence - سره ځينې ځنډ.

تاریخي معلومات

په 1852، د بریتانیا ساینس پوه چې عايشه، لومړی fluorescence وباله. هغه یو نوي مهاله توګه سره د تجربو په پایله کې معرفي fluorspar، چې د ماورای بنفش رڼا لاندې سور رڼا خپروي. عايشه د یوه په زړه پورې پديده ده یادونه وکړه. دا وموندل چې د چراغونه د وړانګو د ويولنته تل د excitation رڼا د جریان په پرتله زیاته ده.

د 19th century په فرضيه تایید هلته یې ګڼ شمیر تجربو شوي دي. دوی وښودله چې د نمونې نوعه د ماورای بنفش د رڼا تر اغېز لاندې fluoresce. د موادو په منځ کې، د نورو شیانو ترمنځ، شوې کرستالونو، الک، منرالونه، کلوروفيل، اومه توکو، عضوی مرکباتو، ويټامينونه، غوړي. د لپاره د بيولوژيکي ازموینو رنګ مستقیم استعمال يوازې په 1930 کال کې پیل

Fluorescence میکروسکوپيکي: توضيحات

د توکو په د 20th century مطالعاتو په لومړۍ نیمایی کارول ځينې لوړ مشخصوي نندارې. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. د کړنو، چې کېدای شي له خوا يې مقايسه ميتودونو ترلاسه نه شي مننه، د fluorescence میکروسکوپيکي ميتود په بایومیدکل او بيولوژيکي څيړنو د يوې مهمې وسيلې شي. په همدې مهم پايلې تر لاسه شوي دي، او د موادو لپاره.

? څه ګټې د fluorescence میکروسکوپيکي ميتود کوي؟ نوي توکو د کارولو بدل امکان او په لوړه کچه د ځانګړو حجرو submicroscopic برخې د انتخاب. Fluorescence میکروسکوپيکي کولای واحد مالیکولونو کشف کړي. د رنګونو نوعه په يو وخت د ډېرو توکو په پېژندنه اجازه. د تجهيزاتو، چې، په خپل وار، د نمونې د ځانګړو ملکیتونو پورې تړاو لري د کریستلوګرافی په حد د محدودو اړخيز حل سره سره، د دې په ټيټه سطحه د مالیکول تشخيص هم د امکان وړ ده. ايريډئيشن نندارتون autofluorescence وروسته له مختلفو نمونو. دا پدیده ده چې په پراخه توګه په petrology، بوټپوهنه، د semiconductor صنعت کارول.

مشخصات

د څارویو د انساجو یا پتوجنونه اکثره پېچلې او یا ډیر کمزوری یا ډېر قوي نامعلومې autofluorescence زده کړه وکړي. که څه هم، په زده کړو د ارزښت په پېژ ته د مادي برخو هیجاني په يو ځانګړي ويولنته معرفي او د اړتيا وړ د رڼا د شدت جريان emitting. Fluorochromes په توګه رنګ د خپلواکه توان ته جوړښتونه (ليدو وړ دی يا پټ) ضميمه عمل وکړي. نو دوی ته د دغه هدف یو لوړ selectivity، او د سوپر حاصل لري.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluorescence میکروسکوپيکي په پراخه کچه د طبيعي او مصنوعي رنګ د ظهور راهيسې کارول شوي دي. دوی د خپریدلو او excitation ځینو شدت پروفایل لري او په نښه ځانګړو بيولوژيکي هدفونه دي.

د انفرادي مالیکولونو د پيژندنې

زیاتره وخت، په مطلوب حالت، تاسو کولای شی یوه جلا عنصر د سترگو ثبت کړي. د دې لپاره، د نورو شیانو ترمنځ، دا ضروري د detector او د نوري شاليد د يو په کافي اندازه ټيټه شور برابر دی. له امله photobleaching کولای شي تر 300 زره. Photons خپروي تر څو د ناکامۍ Fluorescein ماليکيول. په 20٪ د بهير کلکسیون د موثریت او د په اړه د 60 زره یوه اندازه کولای شي د هغوی ثبت کړي.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. پر بنسټ د واورې photodiodes يا برېښنايي ضرب Fluorescence میکروسکوپيکي، اجازه څېړونکو ته د دوهم له لارې د انفرادي د مالیکول د چلند څارنه، او په ځینو مواردو کې آن دقیقو.

پیچلتیا

د نوري شور شاليد د مخنیوی په ګټه یوه مهمه موضوع ده. له امله دا حقیقت چې د توکو د فلټرونو او لينزونو ځينې autofluorescence تبارز ډیزاین کارول ډېر، په لومړيو پړاوونو کې د پوهانو د هڅو د برخې لرلو کم fluorescence د تولید لرونکې شوي دي. که څه هم، ورپسې تجربو ته نوي پایلو دي. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. په ځانګړې توګه، دا وموندل شوه چې په fluorescence میکروسکوپيکي پر بنسټ، د ټولو داخلي انعکاس، چې دا یو کم شاليد او د لوړ شدت excitation رڼا ترلاسه اجازه ورکوي.

میکانیزم

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. د fluorescence میکروسکوپيکي د اصولو پر بنسټ، د ټولو داخلي انعکاس دی د evanescent څپې یا evanescent د استعمال. دا واقع سره په بیلابیلو رسنیو تر منځ د احاطې refractive له شاخصونو. په دې صورت کې په رڼا لازیاد منشور له لارې تېرېږي. دا د یو داسې لوړ refractive شاخص د پاراميټر.

د منشور د اوزون د حل سره کم د پاراميټر یا شیشه تر څنګ. که د رڼا په يوه زاويه وي چې ال مهمه دا یوه بيم، د لازیاد چې په ټولیزه توګه د ليدنمخ څخه انعکاس. دا پدیده ده، په خپل وار، nonpropagating څپو ګرځي. په بل عبارت، د تولید الکترومقناطيسي ډګر چې د سره د ټيټ ته د واټن د 200 څخه کم nanometers refractive شاخص د پاراميټر يوه منځني ورننوزی.

هغه څپه evanescent د رڼا د شدت به کافي fluorophores تعجب وي. که څه هم، ځکه چې د خپل ډېر کوچني ژوره، خپل حجم به ډېرې کمې وي. په پايله کې يو د ټيټې کچې شاليد.

تعديل

Fluorescence میکروسکوپيکي پر ټولو داخلي انعکاس پر بنسټ ولاړه ده، سره دکتلوی-رڼا پلي شي. دا سره د لوړ عددي خولې د لينزونو ته اړتيا لري (لږ تر لږه 1.4، خو دا په زړه پورې دا چې 1.45-1.6 رسیدلی)، او په نامکمله ډګر دستګاه روښانه. وروستنۍ لاسته راوړنې سره د SPOT د کوچنۍ اندازې. د لوی د املا نری حلقوي، چې د ويالې يوه برخه له خوا د بند په کارولو. د بحراني زاويه، وروسته چې ټول انعکاس دی، چې موږ د د په ذره احتجاب منځني او د مايکروسکوپ د پوښونو ښیښه refraction په لوړه کچه اړتیا لري.